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农历十月初九

医麦客：比昂生物为CAR-T设置控制开关

 

2018年11月16日/医麦客 eMedClub/--上海比昂生物医药科技有限公司（以下简称“比昂生物”）作为一家专业从事生物医药开发、生产、销售和技术服务的高新技术企业，与国内外医院和高校建立了良好的合作关系。近日（11月3日），由比昂生物与三个研究单位（上海海洋大学国际海洋生物科学研究中心、国家水生动物病原体采集中心、上海水产动物遗传育种协同创新）合作完成的研究成果发表于国际重要期刊Molecular Sciences。

 

 

 

 

关于此研究

 

 

 

该研究将Tet-on系统整合到CD19CAR结构部件，得到诱导型CD19-CAR（iCAR19）T细胞，这一iCAR19 T细胞显示出四环素衍生物Doxycycline(Dox)依赖的细胞增殖、细胞因子产生、CAR表达以及强CD19特异性细胞毒性。值得注意的是，慢病毒载体和T细胞的所有开发与研究过程均符合GMP标准，且慢病毒载体部分的工作由比昂生物完成。

 

iCAR构成与慢病毒载体图谱

 

iCAR19 慢病毒载体质检结果符合所有标准

 

该研究中数据显示，经Dox 诱导48h，诱导细胞中CAR表达量(25.9 ± 0.5)是未诱导细胞中(5.5 ± 0.3)的5倍。而撤掉Dox 24h后，CAR表达量显著降低超过60% (8.3 ± 0.9)。

 

 

抗原刺激下的快速增殖对CAR-T细胞的抗肿瘤活性是很重要的。该研究中，在CD19的刺激下，iCAR19 T诱导组的细胞增殖和细胞因子产生都显著上调。

 

 

在细胞毒性试验中，Dox 处理的细胞诱导产生显著更强的对靶细胞的特异性裂解作用。在CD19阴性细胞K562中，三个实验组没有统计学差异；而在CD19阳性细胞Raji中，iCAR19 T诱导组的细胞裂解作用显著提高(84% of lysis)。

 

 

 

 

CAR-T控制开关

 

 

 

CAR-T细胞治疗通过基因修饰将T细胞靶向肿瘤特异性抗原，已显示其抗癌的巨大潜能。在不同的CAR-T细胞治疗中，靶向CD19的CAR-T已被广泛研究，且被证实在临床治疗中有显著疗效，如对复发性难治性B细胞恶性肿瘤。

 

而在临床应用其潜在负面影响依然是需要关注的主要问题，如细胞因子释放综合征（CRS）、神经毒性和血细胞数量较少等。为了克服这些难题，比昂生物利用四环素（Tet）调节系统作为CAR-T表达的控制开关，在这一系统中基因表达可被小剂量的Dox 调控。如此的好处是，若临床应用阶段出现难以承受的不良反应，可让患者体内发挥作用的CAR-T停下来，减小治疗的副作用。

 

比昂生物与另三个研究单位的合作研究结果反映，他们成功获得了Tet-on系统诱导型CD19-CAR-T细胞，在保证强大的抗肿瘤效果的同时也增强了安全性。目前，针对此研究成果已开展动物实验和临床前实验，计划并期望在明年初申请临床批件。

 

 

 

关于比昂生物

 

 

 

比昂生物是一家由高层次留学人才杨光华教授创办的高科技基因载体公司；在全国拥有四个技术研发平台，开展基因载体克隆、病毒载体大规模生产工艺、基因药物载体纯化系统、干细胞修饰以及定向分化技术的研发与各类相关的科研项目技术服务外包。公司拥有专利33项、软著7项，发表SCI近20余篇，科研项目12项，研发中心及质量检测实验中心总面积3000平方米，并通过了三体系认证及cGMP认证。公司已为国内外数千家客户提供了相关技术服务，客户遍布全国各大医院、高校和医药相关企业。

 

比昂生物荣获2016第五届中国创新创业大赛生物医药行业总决赛企业组第一名

 

上述研究过程的慢病毒载体便是基于比昂生物2015年专利技术——一种组织特异性兼可调控性慢病毒基因表达载体。该专利性慢病毒载体具有两个各自独立的基因表达盒。两个基因表达盒呈反式方向设置并共享一个PolyA尾巴。一个基因表达盒沿5’至 3’方向含有对药物呈可调控启动子，由其控制外源性目的基因的表达。另一个基因表达盒沿3’至 5’方向含有组织细胞特异性启动子，由其控制转录激活因子。

 

比昂生物专利：一种组织特异性兼可调控性病毒基因表达载体

 

此转录激活因子在四环素衍生物 Doxycycline(Dox) 存在并达到一定剂量下，能激活并放大另一基因表达盒内的可调控启动子从而显著提高目的基因的表达量。此外，在特异的组织细胞内，组织细胞特异性启动子由于该组织内源性转录激活因子对其的作用而活性增强，使受控于该组织细胞特异性启动子的外源性转录激活因子表达提高。也就是说，当此慢病毒载体感染对应组织特异细胞并在Dox存在一定剂量时，受控于可调控启动子的外源性目的基因因双重放大效应而达到最高表达水平。

 

还需要强调的是，该专利性慢病毒载体的双基因表达盒采用反式表达的方式，最大限度减少了外源性核苷酸序列片段，使其可插入有容量限制的慢病毒载体；并对插入的荧光素酶基因不作限定，可自由选择外源性目的基因与可调控启动子的搭配。该载体表达盒无需提高慢病毒滴度转染细胞，仍可保持外源性目的基因可控性表达且可显著提高外源基因表达效率。

 

慢病毒载体结构示意图（来源：比昂生物专利）

 

 

 

 

结语

 

 

 

不得不提出，该Tet-on系统存在中等水平的基础激活，其导致不期望的CAR表达和CAR-T细胞在未诱导状态下的功能性渗漏。减少基础激活，比较和优化四环素调节系统将是需要进一步研究关注的。此外，还包括确定诱导足够的基因表达和治疗功效所需的Dox 的最小剂量，以及进行体内实验以进一步检查诱导型系统的功效。这些将是在继续推进研究的过程中的攻克目标。

 

如今看来，细胞免疫治疗在中国迎来新时机和新转折。而在研究到临床的漫长道路上，包括比昂生物在内的生物科技创新公司身负责任和使命，终将一路前行。

 

参考出处：

https://www.mdpi.com/1422-0067/19/11/3455

http://www.televector.com/News&Events/Company-News/521475.htm

来源：景圆远 医麦客